Agilent Technologies informiert über LAMP-DNA-Amplifikationsmethoden

Agilent Technologies hat einen neuen TekTalk-Newsletter veröffentlicht, der sich auf die Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) konzentriert, eine Technik zur DNA-Amplifikation. Diese Methode bietet aufgrund ihrer Einfachheit, Robustheit und geringen Kosten erhebliche Vorteile gegenüber der traditionellen Polymerase-Kettenreaktion (PCR).

Die LAMP-Technik nutzt Autocycling und Strand Displacement zur Amplifikation von DNA-Proben. Ihre isotherme Natur macht teure Thermocycler überflüssig, was sie zu einer kostengünstigen Alternative macht. Die Methode wird bereits in der Diagnostik, wie der Identifizierung von Infektionskrankheiten, sowie bei der Lebensmittelqualitätskontrolle und Umweltüberwachung eingesetzt.

Der Newsletter stellt zwei neue Anwendungshinweise vor, die den Einsatz des Agilent BioTek Synergy Neo2 Hybrid-Multimode-Lesegeräts zur kinetischen Überwachung von LAMP-Assays beschreiben. Diese Hinweise beleuchten auch den erweiterten Temperaturbereich des Instruments zur Verbesserung der Assay-Leistung. Darüber hinaus werden praktische Ratschläge zur Optimierung von LAMP-Assays, einschließlich der Primerauswahl und des Designs, gegeben.

Im Kern der Technik stehen 2-3 Primerpaare, die spezifische Regionen der Ziel-DNA erkennen. Während der Amplifikationsreaktion werden Wasserstoffionen freigesetzt, die den pH-Wert des Reaktionsgemisches verändern. Diese pH-Änderung kann durch eine kolorimetrische Verschiebung erkannt werden, z. B. wenn Phenolrot von Magenta nach Gelb wechselt, was die Unterscheidung zwischen positiven und negativen Proben ermöglicht.

Über die manuelle Beobachtung hinaus präsentiert Agilent automatisierte Hochdurchsatzmethoden auf Mikrotiterplatten zur Auswertung von LAMP-Assays. Dies beinhaltet die kinetische Messung des Absorptionsverhältnisses bei 420 nm und 560 nm (420:560), was die Zuverlässigkeit erhöht und die Verarbeitung großer Probenmengen ermöglicht.