Agilent: Uusi menetelmä oligonucleotide-puhdistukseen HPLC/MS:llä

Agilent Technologies on kehittänyt uuden menetelmän synteettisten oligonucleotidejen (ON) puhdistamiseksi käyttäen preparatiivista korkean erotuskyvyn nestekromatografiaa massaspektrometrialla (HPLC/MS).

Menetelmän tavoitteena on nopeuttaa ja tehostaa oligonucleotidejen, jotka ovat keskeisiä elämäntieteiden ja diagnostiikan tutkimuksessa, puhdistusprosessia. Aiemmin käytetyt menetelmät, kuten ionipari-käänteisfaasikromatografia (IP-RP HPLC), ovat olleet tehokkaita, mutta skaalattaessa tuotantoon ne ovat vaatineet suuria määriä kalliita reagensseja, kuten heksafluorisisopropanolia (HFIP).

Agilentin uusi lähestymistapa hyödyntää dibutyyliamiinia (DBA) ioniparina ja tris(hydroksimetyyli)aminometaania (TRIS) puskurina. DBA on osoittautunut tehokkaammaksi erottuvuudessa lyhyiden oligonucleotidejen kanssa, ja TRIS korvaa kalliin HFIP:n. Tämä mahdollistaa suurempien erien puhdistamisen edullisemmin.

Menetelmä käyttää Agilent 1290 Infinity II Autoscale Preparative LC/MSD -järjestelmää. Oligonucleotidien puhdistus saavutetaan automatisoidun ohjelmiston avulla, joka optimoi gradientit ja kerää fraktiot massaspektrometriaan perustuen. Uudelleenanalyysit vahvistavat, että puhdistettujen oligonucleotidejen puhtausaste on tyypillisesti yli 99 %.

Yhtiö esitteli tuloksia julisteessa, joka kuvaa menetelmän kykyä tuottaa nopeasti ja selektiivisesti korkealaatuisia oligonucleotideja, mikä edistää niiden laajempaa käyttöä tutkimuksessa ja diagnostiikassa.